數(shù)字分光光度計原理

　　數(shù)字分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

　　單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系為:A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc  式中:A 為吸光度;I。為入射的單色光強度;I 為透射的單色光強度;T 為物質(zhì)的透射率;k 為摩爾吸收系數(shù);L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長;c為物質(zhì)的濃度;

　　物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。

　　數(shù)字分光光度計使用方法步驟

　　1)預熱儀器。為使測定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預熱儀器時和在不測定時應將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。

　　2)選定波長。根據(jù)要求，轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長。

　　3)固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。

　　4)調(diào)節(jié)“0”點。輕輕旋動調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照)。

　　5)調(diào)節(jié)T=。將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的*格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=，即表頭指針恰好指在T=處。

　　6)測定。輕輕拉動比色皿座架拉桿，使有色溶液進入光路，此時表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A。讀數(shù)后，打開比色皿暗箱蓋。

　　7)關(guān)機。實驗完畢，切斷電源，數(shù)字分光光度計將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。